本发明属于分子生物技术领域，涉及小鼠乳腺组织miRNA过表达模型的构建方法及应用。将miRNA外源性试剂—bta-16b-agomiR采用微量进样器经乳腺组织注射，注射后48h处死小鼠，取乳腺组织使用氯仿抽提RNA，再反转录成cDNA后使用荧光定量PCR检测bta-16b-agomiR过表达效果、PGLYRP1与PTX3的mRNA表达水平；取乳腺组织进行HE染色与PGLYRP1、PTX3免疫组化试验。本发明方法可广泛应用于miRNA在小鼠乳腺组织中过表达以及miRNA在活体组织中的相关研究，为乳房炎相关疾病的病理机制、免疫机制等试验提供模型基础。