本发明属于分析化学及临床医学领域，提供了一种UPLC‑Q exactive MS检测精浆中与特发性男性不育相关的β‑丙氨酸和十四烷二酸及其应用。本发明通过采用UPLC‑Q exactive MS比较正常对照和特发性男性不育精浆中的代谢小分子，发现了精浆中存在可用于评估是否患有特发性男性不育，具有诊断价值的β‑丙氨酸和十四烷二酸组合，以及该β‑丙氨酸和十四烷二酸检测的UPLC‑Q exactive MS的应用，研制出可便于临床应用的特发性男性不育诊断、监测试剂盒。