本发明提供了一种全悬浮细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗及其制备方法，属于禽病毒疫苗领域。本发明的方法包括如下步骤：1)使用AGE1细胞悬浮培养新城疫病毒；2)使用MDCK细胞悬浮培养禽流感病毒；3)将步骤1)和步骤2)所得病毒超滤浓缩后灭活，加上药学上可接受的免疫佐剂及其它辅助性成分制备得到疫苗。本发明全悬浮细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的制备方法，能够得到高滴度的病毒；通过本发明的方法制备得到的二联疫苗，能够产生比鸡胚苗更高的抗体，提供更强的保护。