本发明提供了一种毕节小檗组培快繁方法，该方法为：剪取毕节小檗带腋芽嫩茎，经消毒处理后，切成2～3cm带腋芽茎段，横放接种到不定芽诱导培养基中诱导不定芽，得到不定芽苗，然后切成小段，竖直接种于不定芽增殖培养基中进行诱导增殖，得到丛生芽，切成长度为2.5cm～3cm的单株，接种至生根培养基中诱导生根，培养得到毕节小檗无菌苗。本发明以毕节小檗带腋芽嫩茎为外植体，通过消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养建立毕节小檗离体快繁体系，较短时间内获得大量脱毒种苗。