本发明提供了一类抗细菌多肽及其应用，是属于肽类的一种抗生素。抗细菌多肽由赖氨酸与异亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸等疏水氨基酸组成，设计得到At3:KLLKKVVKLFKKLLK，At5:KIIKKIIKIIKKIIK；At8：KLLKKLKKKLKKLLK；At10:IKKIIKIIKKIIKKI氨基酸序列，在水溶液中呈现出无规卷曲的结构，在磷脂膜环境中能够形成比较规则的螺旋结构。本发明的抗菌肽对革兰氏阴性菌有较好的抗菌性能，并且展示出较低的溶血活性。本发明的抗菌肽使得菌体胞内物质流失，导致菌体死亡，作为新型抗菌剂具有广泛的应用前景。