本发明涉及一种绣球原生质体制备及瞬时转化的方法，属于细胞生物学技术领域；本发明选择绣球叶片，将叶缘切除，垂直于主叶脉将叶片切条，放入酶解液中酶解；酶解后加入W5溶液终止消化，然后过滤得到绣球原生质体；并将原生质体瞬时转化。本发明利用叶片制备原生质体不受季节限制，操作简单并易于实现；所用到的酶解液配方简单，获得的原生质体产量高、活性强；酶解液中添加KH2PO4，可显著增加原生质体质膜稳定性，有效保持原生质体活力；本发明还针对绣球叶片原生质体建立了相应的瞬时转化方法，操作简便、转化效率高；为绣球基础和应用研究提供平了重要的技术支持，以促进绣球产业发展。