本发明公开了一种土茯苓组培苗生根结根状茎的方法，包括以下步骤：先在超净工作台上，将土茯苓增殖丛生芽切分成3～5个芽为一小丛，接入壮芽培养基中培养，得到粗壮丛芽；再将得到粗壮丛芽切分成单芽，接入生根结根状茎诱导培养基中培养，55～65d时，每株苗的根数为2～10条，根状茎个数为1～7个，不同处理平均每株苗的根数为2.79～7.33条，平均每株根状茎个数为1.53～5.46个。本发明方法能直接在土茯苓芽生根的同时结根状茎，一个配方诱导出根和根状茎两个器官，而根状茎是土茯苓药用器官，不仅提高了土茯苓的移栽成活率，还能通过增加根状茎数量达到提高土茯苓产量的目的。该方法具有操作简单、重复性好、降低成本、安全高效等优点。