本发明涉及一种唾液或尿液代谢谱分子量校准品试剂盒及其制备方法、使用方法，包括代谢分子校准品、溶解液与分子量校准列表；其中，代谢分子校准品与溶解液的配比为：1份代谢分子校准品对应1‑5份溶解液。本发明的分子量校准品取自生物样本，成本低，制备方便；可涵盖代谢分子检测的0‑350Da范围，且同时适用于正离子和负离子检测模式，可根据需要选择分子量校准品和校准列表；使用方便，可适用于多种离子源质谱仪和多种生物样本的代谢分子区的检测和分子量校准；本发明适用于代谢小分子的准确分子量测定、代谢小分子的结构鉴定和解析、分子精准质谱成像。