本发明公开了一种谷氨酰胺以及同时测定样品中谷氨酰胺和天冬酰胺的方法，属于化学成分测定技术领域。该方法包括：测定待测样品组及其对照组谷氨酸含量。待测样品组：将待测样品与溶有BTI的乙醇溶液及柠檬酸盐缓冲溶液混合并反应，随后与第一酸溶液反应并测定反应后所得的谷氨酸含量C。待测样品对照组中乙醇溶液中不含BTI，所得的谷氨酸含量记为C0。按X＝(C0‑C)÷F得到待测样品中谷氨酰胺的含量X，F为用于校正待测样品组和待测样品对照组的测定结果的校正系数。该方法避免了有毒试剂的使用，同时无需吹氮处理，节约了测定时间，按此方法所得的测定结果准确性较高，测定结果稳定，确保饲料能达到标准含量，保证饲料营养均衡，符合动物生长需要。