本发明公开了一种管道沟槽回填生物酶固化方法，其特征在于，包括：在沟槽的底部回填生物酶混合料A并施加预设浓度的生物酶稀释溶液形成管道垫层，所述生物酶混合料A由泥沙、碎石屑和水泥按照预设比例混合而成；在所述管道垫层的上方铺设管道；在所述管道的周部回填生物酶混合料B并施加所述生物酶稀释溶液，所述生物酶混合料B由粗砂、泥沙、碎石屑和黏土混合而成；对所述管道的顶部进行回填压实。上述管道沟槽回填生物酶固化方法能够减少管道沟槽的不均匀沉降和管道变形，提升管道沟槽抗渗性能和管道包裹材料的板结整体性，防止管道渗漏水造成管道周围的水土流失和坍塌现象。