本发明公开一种烤烟调制定色剂及其制备和使用方法。该烤烟调制定色剂由抗氧化剂、增效剂和表面活性剂组成，在烤烟调制的定色阶段使用。其中，天然抗氧化剂维生素C和维生素E可以有效阻止因烟草调制过程中酚类物质过度氧化而产生的杂色。柠檬酸是抗氧化剂的增效剂，可以显著提高抗氧化剂作用效果。十二烷基硫酸钠是表面活性剂，可以增加烟叶组织结构通透性，一方面是促进抗氧化剂和增效剂进入烟叶细胞组织内部发生作用，另一方面是促进烟叶细胞组织中的水分快速排出来，阻止烟草调制过程因水分排出不及时的酚类物质过度氧化，将黄色固定下来。