本发明公开了一种植物茎段外植体消毒切割装置及方法，装置包括上至下设置的上盖、第一腔室、旋转切割部、第二腔室。旋转切割部包括可相对转动的内环和外环，以及若干长条形刀片。若干长条形刀片成旋转对称结构布置在内环和外环的下端面上，长条形刀片的末端固定在外环上，长条形刀片与内环通过销钉连接，当内环和外环发生相对转动时，长条形刀片能以销钉为中心转动。利用上述装置进行植物茎段外植体消毒切割，能够减小植物茎段外植体在消毒和切割时的暴露时间，提高接种效率。