本发明公开了一种一次性纳米抗菌肥皂纸及其制备方法与应用。该方法包括：采用羧甲基纤维素钠为还原剂和稳定剂制备纳米银，同时插层到蒙脱土(MTT)片层中使其片层剥离，制备得到载银羧甲基纤维素钠/蒙脱土复合抗菌剂；并将其与纳米纤维素(CNF)溶液混合后添加至皂液中，利用抽滤成膜法制备一次性肥皂纸。载银羧甲基纤维素钠/蒙脱土一次性纳米抗菌肥皂纸对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径4.68mm、对大肠杆菌抑菌圈直径5.70mm，具备优越的抗菌性能；同时还具有良好的便捷性、起泡性、去污性、生物可降解性和可溶解性等多种性能，满足现在人群对健康、便携和环保肥皂纸的要求。