本发明公开了一种用于检测牛结节性皮肤病病毒的荧光型RAA试剂盒及其检测方法和应用。该试剂盒包括特异性引物HW‑LSD‑F和HW‑LSD‑R，以及RAA‑exo探针HW‑LSD‑LP。本发明提供的试剂盒利用等温扩增反应，在37～42℃条件下均可实现靶基因的有效扩增，可在20min内实现牛结节性皮肤病病毒的检测，特异性为100％，检测敏感性为12copies/μL。本发明中的试剂盒操作简单、快速、灵敏，为牛结节性皮肤病病毒的现场快速检测筛查提供有效的技术手段，同时对于控制牛结节性皮肤病病毒的传播具有非常重要意义。