本发明公开了人源诺如病毒GII.4型的特征性核酸鉴别引物组、试剂盒和检测方法。其包括正向引物、反向引物和探针；所述的正向引物选自RF1或RF2；反向引物选自RR1‑RR4中的任一条。本发明靶向针对诺如病毒主要流行型GII.4基因型，10分钟即可完成检测，检测限可达到每个反应2.67×101copies，对GI型诺如病毒、星状病毒、札幌病毒、轮状病毒、肠病毒、腺病毒，以及GII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.8、GII.17等其他型别诺如病毒均无扩增信号；本发明应用实际临床样本检测，结果显示与荧光定量RT‑PCR的契合度达到了88.90％。本发明建立的检测方法灵敏度高、特异性好、周期短，适用于现场实时检测，可广泛应用于医疗卫生、检验检疫等具有诺如病毒检测需求的领域。