本发明公开了一种基于苯并噻唑类希夫碱荧光探针的制备方法及应用，属于金属离子检测的荧光探针技术领域。本发明荧光探针，分子式为C34H31N5O2S2，制备方法为：(1)通过2‑羟基‑5‑甲基苯甲醛和2‑氨基苯硫酚反应得到化合物a；(2)化合物a和六亚甲基四胺通过达夫反应生成化合物b；(3)化合物b与二亚乙基三胺通过缩合反应得到探针分子L。在无水乙醇：Tris‑HCl＝3:2的溶液中将探针分子与锌离子进行反应，利用荧光强度的变化可检测锌离子的浓度。本发明探针合成简便、反应条件温和，对锌离子具有高的选择性、灵敏度高，响应范围是0‑8.00μM，检出限是60.4nM。此外，通过激光共聚焦扫描显微技术，该新型荧光探针成功应用于细胞中锌离子的检测。