本发明公开了一种三螺旋DNA分子开关探针及其在OTA比色快速检测中的应用。三螺旋DNA分子开关探针主要由一条富含G碱基，形成平行的G‑四链体结构，可提高G‑quadruplex‑hemin的过氧化物酶活性的DNA链GP27和一条含有赭曲霉毒素A(OTA)适配体序列的DNA链AP9杂交组装形成，且杂交组装形成的三螺旋DNA分子开关探针应用在OTA比色快速检测中。本发明的三螺旋DNA分子开关探针能用于OTA的灵敏、快速比色检测，提高了检测的灵敏度，避免了使用DNA扩增或纳米材料放大检测信号，所用DNA链不需标记，检测过程无分离、清洗等步骤，在保持检测灵敏度的同时极大地简化了检测步骤，检测简单、快速，成本低廉，具有良好的应用前景。