本发明提供了一种用于构建测序文库的接头，其通过第一核苷酸单链与第二核苷酸单链部分结合而形成，所述第一核苷酸单链包括第一通用引物序列、第一测序引物序列和位于所述第一通用引物序列与所述第一测序引物序列之间的单分子标签，所述第二核苷酸单链包括第二通用引物序列、与所述第一测序引物序列部分互补的第二测序引物序列和位于所述第二通用引物序列与所述第二测序引物序列之间的样本标签，所述第一通用引物序列为AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC，所述第一测序引物为ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC T，所述第二通用引物序列为ATCTCGTATGCCGTCTT CTGCTTG，所述第二测序引物为GATCGGAAGAGCACA CGTCTGAACTCCAGTCAC。根据本公开，能够提供一种能够提高二代测序准确性的用于构建测序文库的接头和测序文库的构建方法。