本发明提供一种基于生物3D打印的立体血管化肌皮瓣的制作方法，利用同轴式生物3D打印，以氯化钙溶液作为内层，将甲基丙烯酸酐化明胶，海藻酸钠，聚乙二醇二丙烯酸酯及血管平滑肌细胞混合作为外层生物墨水，打印出的支架通过氯化钙和蓝外光照进行彻底交联，最后形成三位一体化可灌流支架，从而建立血运。在支架内灌注血管内皮细胞，模拟血管细胞成分。在三层支架上分别接种成纤维细胞，脂肪间充质干细胞，骨骼肌成肌细胞，分别加入成纤维细胞培养基，成脂诱导培养基及成肌细胞培养基并放置于反应器中进行培养，将三层支架进行折叠，通过鼠尾胶原进行粘接，形成堆叠式支架。本发明实现了血流的一体化灌注，不同细胞成分的独立培养分化以及组装。