本发明提出了一种三维细胞培养支架、成纤维细胞凝胶及其制备方法，涉及生物材料技术领域。该三维细胞培养支架的制备方法，包括如下步骤，将透明质酸钠交联、冻干后即得到三维细胞培养支架，通过对透明质酸钠进行交联改性，制备成具有一定微孔径的三维细胞培养支架，能使细胞均匀分布，且具有良好的透气性，不会对细胞的活性造成抑制。此外本发明还提出一种成纤维细胞凝胶的制备方法，包括如下步骤，成纤维细胞培养和成纤维细胞凝胶制备，既能使成纤维细胞在支架中正常生长，又能使成纤维细胞在支架中均匀分布活性的同时，使成纤维细胞能正常发挥作用。