本发明一种骨关节炎关节液来源的间充质干细胞的培养方法，属于间充质干细胞培养技术领域。所述培养方法包括：(1)关节液来源的间充质干细胞的提取扩增；(2)关节液来源的间充质的扩增。所述培养方法还包括采用流式细胞技术对P3代细胞进行表型鉴定的步骤。本发明的培养方法具有以下优点：骨关节炎关节液来源的间充质干细胞具有采集方便、处理简单、具有较好的多向分化潜能等优势，并且能够采用患者自体关节液来源的干细胞回输至自身病灶处，极大地减少了免疫排斥反应的发生率以及伦理相关问题。