本发明公开了一种纳米微球抗生物膜肽CRAMP及其制备方法和应用，纳米微球抗生物膜肽CRAMP制备方法如下：将CRAMP制成溶液，活化CRAMP羧基，然后加入壳聚糖溶液使壳聚糖与CRAMP羧基偶联，形成壳聚糖‑CRAMP偶联物，再将壳聚糖‑CRAMP偶联物的氨基活化后加入氧化石墨烯胶体溶液，充分反应得到纳米微球抗生物膜肽CRAMP。该纳米微球抗生物膜肽CRAMP能显著减少生物被膜量，有更好的稳定性，以及更低的细胞毒性，有望开发成为可供内服的抗生物被膜感染的新型纳米制剂。