本发明提供了一种永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，解决了现有技术中麝鼠香腺细胞体外培养易凋亡的问题。该方法包括下述步骤：(1)在8月份麝鼠泌香盛期，采集雄性成年麝鼠香腺组织，将香腺组织剪碎并进行体外培养，获得麝鼠香腺成纤维细胞；将麝鼠香腺成纤维细胞进行慢病毒转染，获得转染的麝鼠香腺成纤维细胞；(2)将步骤(1)中得到的转染的麝鼠香腺成纤维细胞通过嘌呤霉素筛选出转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞；(3)对筛选出的转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞进行扩增培养，即可获得永生化麝鼠香腺成纤维细胞。本发明提供的永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，采用慢病毒转染的方式永生化麝鼠香腺成纤维细胞，培养14代以后完全能保持成纤维细胞的特性，克服了体外培养成纤维细胞凋亡的缺点。