本发明公开了一种以花椒为碳源的碳量子点及其制备方法与应用，所述碳量子点平均粒径为3~5 nm，表面含有羟基、胺基、酯类和烯类，最大激发波长与最大发射波长分别为450 nm和490 nm；具体制备过程为先将花椒粉碎后加入去离子水，搅拌分散后进行水热反应，反应产物自然冷却后进行离心分离，然后过滤；将滤液真空冷冻干燥后得到花椒为碳源碳量子点的粉末。本发明提供的碳量子点具有较强的荧光和良好的生物相容性，可以进入细胞内并且均匀分布在HeLa细胞中，具有一定的抗菌性能。