本发明涉及花粉提取技术领域，公开了板栗花粉提取物的制备方法及应用。板栗花粉提取物在制备免疫力调节，提取物在制备促进巨噬细胞吞噬活性，与Con A协同促进脾淋巴细胞增殖，或激活加强NK细胞杀伤活性的药物或食品中的应用，板栗花粉提取物中含有黄酮和活性肽。板栗花粉提取物的制备方法，以水为溶剂，进行黄酮提取；然后以水为溶剂，酶解提取滤渣中的活性肽；合并两次提取的产物。本申请提供的制备方法，采用分开提取的方式分别提取板栗花粉中的黄酮和活性肽，可充分提取花粉中的黄酮和活性肽等活性物质，应用于免疫力调节以及促进免疫细胞活性时效果更好，大大降低了板栗花粉的有效剂量。