本发明提供了一种测定动物源性饲料原料及饲料中生物胺的检测方法，包括以下步骤：（1）制备混合标准工作溶液；（2）根据标准制备试样；（3）称取样品置于100mL具塞三角瓶中，并加入1%磺基水杨酸溶液，进行提取；（4）移取上清液至离心管中，加入6%磺基水杨酸溶液；（5）加入脱脂剂二氯甲烷，将离心管震荡；（6）将离心管离心；（7）将样品稀释至浓度为6mg/kg‑30mg/kg，采用2 mol/L或4mol/L氢氧化钾溶液调节pH为2.5~5.5混匀；（8）将混匀的液体经过水相滤膜，过滤至样品瓶中；（9）使用氨基酸分析仪对样品进行生物胺含量检测：生物胺含量由其目标分析物峰面积和标准品峰面积之比采用外标法进行定量。本发明操作较为简单、衍生效果好、结果稳定。