本发明公开了一种双特异性识别阿苯达唑和多菌灵的抗体制备和应用。本发明通过将半抗原偶联到载体蛋白上，制得两种人工抗原，将两个人工抗原分别用于动物免疫和作为包被原，通过细胞融合，制备能分泌抗阿苯达唑和/或多菌灵抗体的杂交瘤细胞，再利用包被原进一步建立一种基于间接竞争酶联免疫法的检测方法。该检测方法检测阿苯达唑和/或多菌灵具有特异性强、灵敏度高、快速简便等特点，其中，阿苯达唑IC50值为0.04ng/mL，线性范围为0.02～0.09ng/mL；多菌灵IC50值为3.35ng/mL，线性范围为0.95～11.77ng/mL。并且根据该检测方法既可以用于动物性食品中阿苯达唑的检测，也可以用于蔬菜中多菌灵的检测，实现多种用途。