本发明公开了一种桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法及应用，属于中药活性成分的分离提纯技术领域，方法如下：干燥桦褐孔菌子实体用二氯甲烷溶液45℃低温水浴回流提取，提取液浓缩干燥得到粗提物；运用中压制备色谱仪进行分离，得到Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5五个组分；组分Fr2分离纯化，组分Fr3分离纯化，得到Rf值不相同第一单体化合物、第二单体化合物、第三单体化合物、第四单体化合物和第五单体化合物，通过本发明可以实现桦褐孔菌三萜类化合物的目标制备，一次性可获得多个已知活性的桦褐孔菌三萜类单体，同时通过本发明方法得到的桦褐孔菌三萜类单体化合物能够应用于制备抗癌药物。