本发明提出一种菌种活性检测方法，属于食用菌培养技术领域。包括如下步骤：步骤(1).将参照菌种转接至平皿，在平皿中进行培养，并设定不同的温度和培养时间，得到参照菌种成功复活的临界高温和临界培养时间；步骤(2)将所选育的菌种转接至平皿，在平皿中进行培养；步骤(3).当平皿中菌丝长到直径为2cm时，将平皿放入参照菌种的临界高温和临界培养时间下进行培养；步骤(4).观察选育菌种的菌丝是否能迈过临界高温并成功复活，判断菌种的活性。本发明通过设定临界高温来筛选菌种，让选育后的菌种能够适应较宽、较高的温度范围，适应范围广，稳定性好，高产性强。