本发明公开了用于检测新型鹅呼肠孤病毒的引物、试剂盒及其检测方法与应用，所述新型鹅呼肠孤病毒检测引物对和探针均靶向新型鹅呼肠孤病毒的λC基因。新型鹅呼肠孤病毒检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明中的新型鹅呼肠孤病毒(NGRV)检测引物对和探针特异性强，灵敏度高，最低可检测限为56.6个拷贝，且检测方法操作简单，重复性好，可以快速、准确、高通量地进行定量分析，有利于在临床实践中推广应用。