本申请提供一种仿生细胞外基质生物活性物质覆层聚酯网状片层支架，其包括表面羧基化的网状片层及覆盖在所述聚酯网状片层表面的生物活性物质覆层，所述网状片层采用聚酯材料制成，所述生物活性物质覆层通过在所述网状片层经过多次偶联而成，所述生物活性物质覆层外还设有封闭层。本申请通过将合成聚酯高分子材料具备一定的机械性能、可塑性的优势与天然高分子材料良好的生物相容性相结合，使得本申请的支架不仅具有一定的机械强度和良好的生物相容性，为细胞培养提供仿生的培养环境。