本发明公开了一种荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液、其制备方法及其应用，属于微生物及微生物制剂技术领域。本发明的荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液；是由荧光假单胞杆菌进行生物发酵合成纳米硒后，由荧光假单胞杆菌及其合成的纳米硒组成的混合液；所述荧光假单胞杆菌为荧光假单胞杆菌KBD‑1；该菌株于2020年08月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.20567。本发明荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液对作物病毒病具有较好的防治效果，为作物病毒病的防治提供新的微生物资源；此外，还对作物具有促生效果，且效果显著。