本发明公开了一种利用HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器筛选幽门螺杆菌脲酶抑制剂的方法，步骤包括1)HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器的制备及表征；2)以HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器检测0～100mM梯度浓度尿素产生的响应电流，根据米氏方程计算得到该生物传感器检测尿素的Ka，尿素和Vmax，尿素；3)检测不同脲酶抑制剂筛选分析各个抑制剂的抑制类型和抑制常数。本发明方法中开发的HPUb/nPt/NPG/GCE生物传感器制备过程简单，检测稳定性高，易于存放，同时本发明提供的筛选方法与其他检测方法相比，不需要复杂的样品前处理过程，且操作简单，检测迅速，有效缩短了潜在的脲酶抑制剂筛选时间，应用前景广阔。