本发明公开了一种促进大肠杆菌周质表达单域抗体的方法，属于生物抗体表达技术领域。在诱导表达前对转化有单域抗体基因的大肠杆菌进行0℃冰激处理，处理5‑10min，然后利用低剂量IPTG诱导菌种表达，10‑22℃低温培养，获得大肠杆菌周质表达的单域抗体。本发明所述方法能够将单域抗体表达正确定位于周质空间，克服大肠杆菌在定向周质表达重组单域抗体时无法正确分泌而堆积在胞内的缺陷，同时，该方法还能够有效促进单域抗体在大肠杆菌周质空间中以单体可溶形式高效表达，从而使后续抗体纯化和应用易于实现。