本发明涉及分子生物技术领域，特别涉及用于膀胱癌早期筛查的引物和探针组合、试剂盒及应用，用于膀胱癌早期筛查的引物和探针组合，包括与膀胱癌人群早期甲基化位点相关的4对靶标特异引物及对应的内参引物、特异性引物探针。与现有技术相比，本发明基于DNA甲基化的检测，简单易行、判读客观，避免了人为判读结果的主观性，提高了准确率；同时本发明的检测方法具有非侵入性，能避免膀胱镜检查引发的并发症，提高患者依随性，用于肿瘤的早期筛查、早期诊断、疗效评价和追踪以及预后评估。