本发明公开了一种法庭科学偏振光显微镜检验用纤维比对片及其制备方法。所述制备方法包括如下步骤：S1、将若干根已知材料的纤维粘结于载玻片上，形成网状形；S2、将盖玻片盖于所述载玻片上，进行干燥，并在所述载玻片的一端标记纤维种类；纤维的长度为1～2cm；采用剪刀、镊子和分离针从已知材料的纺织品或纤维样品中分离所述纤维。纤维的偏振光检验主要通过观察不同纤维的干涉特征来进行种类鉴别和区分，对于实践经验要求很强。仅通过单一检材或样品的检验往往存在特征难以确认等情况，通过本发明已知结果的纤维比对片与检材或样本进行比对，可以快速、有效、准确的对不同种类纤维、同种类不同厂家不同工艺的纤维进行鉴别和区分。