本发明公开了一种检测恩诺沙星和金刚烷胺的两用试纸条及其制备方法和检测方法，涉及分子检测技术领域。通过两条检测线可同时检测金刚烷胺与恩诺沙星两种物质，而无需任何仪器设备，操作简便快捷，手动操作同时通过肉眼即可读取结果，大大提高了实地现场检测金刚烷胺与恩诺沙星残留超标的效率，在恩诺沙星和金刚烷胺药物的快速免疫检测应用中将有广阔的前景，同时上述两用试纸条的提出也为市场监测提供了强力保障。该试纸条具有特异性好，稳定性好的优势。此外，还提供了一种检测恩诺沙星和/或金刚烷胺的方法，该检测方法可以满足恩诺沙星和金刚烷胺的快速精准检出。