本发明属于医学检测技术领域，公开了一种用于无精子症和严重少精子症检测的特异性标志物筛选方法，对样品进行收集，并对样品进行处理，筛选出严重少精症、无精症的特异性标志物；睾丸组织层面，利用芯片方法筛选正常男性和不育男性睾丸组织中差异microRNA的表达；精浆层面，用蛋白组学方法寻找正常男性和不育男性的差异标记蛋白；尿液层面，利用代谢组学，筛选正常男性和不育男性尿液中代谢产物的差异；整合从睾丸组织层面、精浆层面和尿液层面三个高通量层面获得数据，将这些数据进行与精子质量、密度、活力之间的关联分析；诊断技术优化和建立。本发明检测耗时长、效率高且能解释患者生精障碍的原因。