本发明设计一种基于丙二酰辅酶A再生的柚皮素体外酶促合成方法，在构建乙酰辅酶A合成酶ACS基因与乙酰辅酶A羧化酶ACC1基因的重组表达质粒的基础上，将重组质粒分别转化大肠杆菌和酵母细胞，表达目的蛋白，并将纯化的ACS与ACC1重组蛋白加入柚皮素体外酶促合成体系中，实现了丙二酰辅酶A的再生，以及以4‑香豆酸为底物在体外低成本酶促合成柚皮素。本发明设计了一个新的反应体系，无需添加昂贵的丙二酰辅酶A便能对其进行再生利用，并最终生成柚皮素。