本发明公开了一种超支化抗菌型聚氨酯反渗透膜及其制备方法，该反渗透膜为超支化聚氨酯纳米纤维膜。该反渗透膜的制备方法包括：首先采用二异氰酸酯与聚二醇预聚，经扩链、交联得到异氰酸酯基封端的聚氨酯预聚体，接着采用端羟基或端胺基超支化聚合物改性聚氨酯预聚体制备得到异氰酸酯基封端的超支化聚氨酯，再用抗菌小分子双胍基盐酸盐进行接枝反应得到超支化抗菌型聚氨酯。将得到的超支化抗菌型聚氨酯经有机溶剂稀释，采用静电纺丝技术，经真空干燥制备得到超支化抗菌型聚氨酯反渗透膜。根据本发明的抗菌反渗透膜，结构稳定，抗菌性能好，通透性好，在海水、苦咸水淡化，废水资源化，锂离子电池隔膜和物质分离浓缩等领域有着潜在应用价值。