本发明涉及生物工程领域，公开了由葡萄糖生产D‑阿洛酮糖的方法，该方法包括在D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶活性聚集体和葡萄糖异构酶的存在下，将葡萄糖转化为D‑阿洛酮糖。相比于使用D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶进行D‑阿洛酮糖的生产，本发明所述的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶活性聚集体由于稳定性更好，能够回用，进而能够延长利用葡萄糖生产D‑阿洛酮糖的时间或增加生产批次，且还利于酶的分离，降低分离成本，也利于后续D‑阿洛酮糖的纯化，利于工业化生产。