本发明提供了一种基于WST‑8显色反应测定活菌总数的方法，包括以下步骤：将重悬后的待测细菌悬液与显色底物溶液混合反应0.5‑4h，得到待测反应液；通过测定反应液的吸光度值，得到活菌总数。显色底物溶液包括2‑(2‑甲氧基‑4‑硝基苯基)‑3‑(4‑硝基苯基)‑5‑(2,4‑二磺基苯基)‑2H‑四唑鎓盐、电子载体1‑甲氧基‑5‑甲基酚嗪硫酸甲酯盐和细菌生长营养物质。本发明首次利用WST‑8的显色反应来进行活菌检测，显色底物溶液中细菌生长营养物质的存在能有效提高细菌细胞中脱氢酶含量，从而提高细菌检测的灵敏度，该方法具有操作方便、检测方法快速、灵敏度高、细菌检测范围广的特点。