一种检测细胞色素P450 2C9的近红外型荧光探针及其应用，其属于生物医药技术领域。该特异性探针底物可用于测定生物体系中CYP2C9的酶活性。CYP2C9酶活性测定的流程如下：选择1,3‑二氯‑7‑烷氧基‑9,9‑二甲基‑2(9H)‑吖啶酮O‑脱烷基反应为探针反应，通过定量检测单位时间内底物1,3‑二氯‑7‑烷氧基‑9,9‑二甲基‑2(9H)‑吖啶酮的消除量或其脱烷基代谢产物的生成量来测定各类生物样品中CYP2C9酶的活性。本发明可用于不同来源、不同种属、不同个体的生物样本中CYP2C9酶活的定量评估以及生物体中CYP2C9的成像，以期实现CYP2C9处置药物能力的评估。还可用于CYP2C9活性调节剂的体外快速筛选，评估药物及候选化合物等由于抑制或激活CYP2C9催化活性而导致药物药物相互作用的潜在性。