本发明属于分子生物检测领域，提供了一种基于端粒酶扩增的外泌体膜蛋白检测方法，以外泌体膜蛋白为靶标，以免疫磁珠捕获外泌体，设计带有识别序列的发夹结构探针，并利用端粒酶扩增的方式进一步放大信号，实现外泌体膜蛋白的可视化检测。本发明还包括该发夹结构探针及其应用。本发明的分离方法便捷，所用材料部分已商品化，生物安全性高。本发明的检测过程适合临床检测需求，不需借助专业仪器，反应仅需水浴锅进行，适应基层医疗检测需求，成本低廉、检测灵敏、特异性高且可视化，可以很好的对外泌体膜蛋白进行分析。