本发明公开了一种动物双歧杆菌发酵滤液、制备方法及其应用。所述发酵滤液由包含下述步骤的方法制备得到：将动物双歧杆菌接种到种子培养基中进行培养，得到种子液；将种子液接种到含有麦芽提取物、氯化钙和葡萄糖的发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；将所述发酵液进行离心、过滤处理得到动物双歧杆菌发酵滤液。所述的发酵滤液具有显著的屏障修复功效，与未添加该产品的空白对照相比，皮肤的角质层含水量提高9％‑10％、经皮水分散失量降低5％，可应用于化妆品领域，用于皮肤屏障修复产品的研发。