本申请公开了线粒体靶向的过氧亚硝酸根/亚硫酸氢根双响应荧光探针，属于化学生物材料技术领域。针对大多数的探针缺乏生物靶向性、无法同时检测两种分子，导致无法深入研究生物体内同时存在2种及以上的小分子与某一特定疾病的关系并研究其致病机理的问题。本申请线粒体靶向的过氧亚硝酸根/亚硫酸氢根双响应荧光探针能够靶向线粒体；该荧光探针的制备方法是氮气保护下，将间二乙氨基苯酚，氢化钠溶于N,N‑二甲基甲酰胺中，室温下搅拌；后将近红外染料IR‑780加入反应液中，加热反应；后将反应液浓缩，经柱层析分离得到目标化合物NI，即为过氧亚硝酸根/亚硫酸氢根双响应荧光探针。