本发明涉及了一种同时检测赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1的荧光适配体传感器制备方法，包括以下步骤：采用PCR退火程序制备DNA双标记链。传感器以由3’端被猝灭基团标记的DNA链S1，5’端被猝灭基团标记的DNA链S2及3’和5’均被荧光基团修饰的DNA链S3杂交而形成。根据响应信号的变化，得到了一种同时检测赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1的荧光适配体传感器。同其它用于赭曲霉毒素A及黄曲霉毒素B1检测的荧光传感器相比，所制备的荧光适配体传感器具有灵敏度高、重复性好、准确度高的优点。