本发明公开了一种细胞核仁成像红色荧光碳点及其制备方法和应用，该红色荧光碳点包括以下重量份的原料：刚果红1份，对苯二胺1‑10份。本发明的荧光碳点以对苯二胺和刚果红为原料，采用一步水热法制得，本发明制备的碳点不但能够实现对哺乳动物细胞的细胞核核仁的快速、免清洗、长时间和光稳定(抗漂白)成像，还可以应用于模式动物(如斑马鱼、线虫)的活体细胞核仁荧光成像。此外，该碳点还具有制备成本低、水分散性好、细胞毒性低和斯托克斯位移较大等优点，可以取代目前广泛使用的商品化核仁荧光探针。