本发明公开了一种鳖甲特征肽段及其检测方法，本发明通过大量实验筛选，筛选出序列为Gly‑Leu‑Hyp‑Gly‑Gln‑Hyp‑Gly‑Asp‑Ser‑Gly‑Pro‑Ala‑Gly‑Lys的鳖甲特征肽，这条鳖甲特征肽具有很高的专属性，可用于鉴定含有鳖甲药材的药品。本发明提供的鳖甲特征肽的检测方法，通过大量实验筛选出最佳的色谱条件和质谱条件，整个方法操作简单，判断准确，能准确区分鳖甲特征肽。本发明提供的鳖甲特征肽及其检测方法，有利于鳖甲药品的质量控制，对于含有鳖甲药品的质量保证具有重要的意义。