本发明涉及一种抗SARS‑CoV‑2S1‑RBD单克隆抗体28D9，其重链为IgG1型，轻链为Kappa型，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，该抗体具有天然构象表位，与SARS‑CoV‑2S1蛋白及SARS‑CoV‑2S1‑RBD均具有良好的反应原性，具有高特异性、高灵敏度、高效价等特性。本发明基于SARS‑CoV‑2S1蛋白抗原表位建立了一种双抗体夹心ELISA检测方法，可用于定量检测SARS‑CoV‑2灭活病毒及SARS‑CoV‑2S1蛋白，重复性好、精密度强、灵敏度高、显色背景低、线性良好。